一、實驗原理
CCK-8（Cell Counting Kit-8），就是進行細胞計數的一種試劑盒。CCK-8實驗主要用于檢測細胞增殖、細胞毒性相關的實驗。
CCK-8試劑盒中最主要的化學藥品是WST-8，化學名為2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽。它的核心基團和MTT是一樣的，是MTT的升級版本。在電子耦合試劑（也就是細胞是活的，有呼吸，有能量代謝）存在的情況下，可被NAD+氧化還原成為水溶性的黃色甲瓚產物(Formazan)。活細胞越多，產生的Formazan就越多，顏色也會越深。
二、CCK8的用途
CCK-8實驗主要用于以下研究：
1. 細胞增殖
2. 藥物篩選
3. 細胞毒性測定
4. 腫瘤藥敏試驗
三、CCK8的優點：
1. 酚紅和血清對CCK-8法的檢測不會造成干擾；
2. 細胞毒性非常低，因此加入WST-8顯色后，可以在不同時間反復用酶標儀讀數從而找到最佳測定時間。
三、實驗步驟：
1. 在96孔板中配置100μL的細胞懸液。將培養板在培養箱預培養24小時（37℃，5% CO2）。
2. 向培養板加入10μL不同濃度的待測物質。
3. 將培養板在培養箱孵育一段適當的時間（例如：6、12、24或48小時）。
4. 向每孔加入10μL CCK溶液（注意不要再孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數）。
5. 將培養板在培養箱內孵育1-4小時。
6. 用酶標儀測定在450nm處的吸光度。
7. 若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。24小時內測定，吸光度不會發生變化。
注意：如果待測物質有氧化性或還原性的話，可在加CCK之前更換新鮮培養基（除去培養基，并用培養基洗滌細胞兩次，然后加入新的培養基），去掉藥物影響。當然藥物影響比較小的情況下，可以不更換培養基，直接扣除培養基中加入藥物后的空白吸收即可。
計算公式：
細胞存活率 = [（實驗孔 — 空白孔）/ （對照孔 — 空白孔）] × 100%
抑制率 = [（對照孔 — 實驗孔） / （對照孔 — 空白孔）] × 100%
實驗孔 （含有細胞的培養基、CCK-8、待測物質）
對照孔 （含有細胞的培養基、CCK-8、沒有待測物質）
空白孔 （不含細胞和待測物質的培養基、CCK-8）
五、注意事項
1. 第一次做實驗時，建議先做幾個孔摸索接種細胞的數量和加入 CCK-8 試劑后的培養時間。
2. 接種時注意細胞懸液一定要混勻，以避免細胞沉淀下來，導致每孔中的細胞數量不一致。
3. 培養板周圍一圈孔培養液容易揮發，為減少誤差，建議培養板周圍的四邊每孔只加培養基。
4. 建議采用多通道移液器，減少平行孔間的誤差，加 CCK-8 時，建議斜貼著培養板壁加，不要插到培養基液面下加，容易產生氣泡，干擾 OD 值。
5. 若細胞培養時間較長，培養基顏色或 pH 發生變化，建議更換培養基后再加 CCK-8，含有酚紅的培養基不影響測定。
6. CCK-8 反復凍融會增加背景值，干擾實驗測定。
CCK-8檢測細胞增殖
