RIP實(shí)驗(yàn)
RIP技術(shù)（RNA Binding Protein Immunoprecipitation,RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀），是研究細(xì)胞內(nèi)RNA與蛋白結(jié)合情況的技術(shù)，是了解轉(zhuǎn)錄后調(diào)控網(wǎng)絡(luò)動(dòng)態(tài)過(guò)程的有力工具，能幫助我們發(fā)現(xiàn)miRNA的調(diào)節(jié)靶點(diǎn)。
RIP這種新興的技術(shù)運(yùn)用針對(duì)目標(biāo)蛋白的抗體 <https://www.biomart.cn/category/10010101.htm>把相應(yīng)的RNA-蛋白復(fù)合物沉淀下來(lái)，然后經(jīng)過(guò)分離純化就可以對(duì)結(jié)合在復(fù)合物上的RNA進(jìn)行PCR定量分析。RIP可以看成是普遍使用的染色質(zhì)免疫沉淀ChIP技術(shù)的類似應(yīng)用，但由于研究對(duì)象是RNA-蛋白復(fù)合物而不是DNA <https://www.biomart.cn/supply/1008010306.htm>-蛋白復(fù)合物，RIP實(shí)驗(yàn)的優(yōu)化條件與ChIP實(shí)驗(yàn)不太相同（如復(fù)合物不需要固定，RIP反應(yīng)體系中的試劑 <https://www.biomart.cn/supply/10010.htm>和抗體絕對(duì)不能含有RNA酶，抗體需經(jīng)RIP實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證等等）。
RIP-seq是RIP與高通量測(cè)序相結(jié)合的技術(shù)，通過(guò)免疫沉淀目標(biāo)蛋白來(lái)捕獲蛋白體內(nèi)結(jié)合的RNA,將捕獲的RNA進(jìn)行高通量測(cè)序，分析目的蛋白在體內(nèi)結(jié)合的RNA的動(dòng)態(tài)變化，闡述目的蛋白對(duì)基因表達(dá)調(diào)控的分子機(jī)制。RIP不僅能研究miRNA與蛋白的作用，還可以研究lncRNA與蛋白的互作。
RIP具體實(shí)驗(yàn)流程如下：
RIP實(shí)驗(yàn)步驟
1. 細(xì)胞裂解
2. 磁珠準(zhǔn)備
3. RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀
4. RNA純化
5. RT-PCR檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)結(jié)果示例
